一种文蛤多糖的分离纯化方法，涉及生物分离纯化技术领域。本发明主要采用文蛤软体匀浆，加酶辅助热水浸提，悬蒸浓缩，乙醇沉淀获得文蛤多糖粗品，然后sevage法脱蛋白，再采用DEAE-52纤维素阴离子交换柱层析、Superdex 200凝胶过滤柱层析对文蛤多糖逐级分离纯化，纯化获得的文蛤多糖为两种单一多糖，纯度达90%以上。使获得的文蛤多糖精品能用于药品、化工、保健营养品及化妆品的原料或添加剂。也为文蛤多糖的进一步研究提供了基础。