本发明提供了生产反异脂肪酸的方法。所述方法包括在允许一种或更多种多核苷酸的表达和反异脂肪酸的生产的条件下培养细胞，所述细胞包含至少一种外来的或过表达的多核苷酸，所述多核苷酸包含编码多肽的核酸序列，所述多肽催化下列反应中的至少一种：丙酮酸至柠苹酸的转化；柠苹酸至柠康酸的转化；柠康酸至β-甲基-D-苹果酸的转化；β-甲基-D-苹果酸至2-氧代丁酸的转化；或苏氨酸至2-氧代丁酸的转化。任选地，所述细胞还包含至少一种外来的或过表达的多核苷酸，所述多核苷酸包含编码多肽的核酸序列：所述多肽催化下列反应：2-氧代丁酸至2-乙酰-2-羟丁酸的转化、2-乙酰-2-羟丁酸至2,3-二羟基-3-甲基戊酸的转化、和/或2,3-二羟基-3-甲基戊酸至α-酮基-3-甲基戊酸的转化。本发明也提供了生产反异脂肪酸的细胞以及使用所述细胞生产反异脂肪酸的方法。