本发明提供了一种基于固定化酶的毛细管电泳柱后检测接口，包括检测接口盖、透明窗片和位于检测接口盖和透明窗片之间的密封垫片，所述密封垫片上设有镂空的反应通道，所述检测接口盖与密封垫片之间设有盖在所述反应通道上的固定化酶的膜，且检测接口盖设有分别与反应通道两端相通的反应液入口和废液出口，所述检测接口上还设有与所述反应通道相通并用于插入毛细管的毛细管接口，所述毛细管接口位于反应通道的反应液入口，该检测接口能显著减少酶的用量，提高酶的稳定性和活性，能有效防止反应通道中死体积和稀释效应的产生，提高检测灵敏度，为固定化酶的毛细管电泳柱后检测提供了一个理想的检测接口，可用于酶催化反应的毛细管电泳柱后检测。