本发明公开了一种胶体金层析法抗Sp100抗体检测试纸以及制备方法。其胶体金层析法抗Sp100抗体检测试纸，包括有样品垫、结合垫、硝酸纤维素包被膜、吸水垫，所述样品垫、结合垫、硝酸纤维素包被膜、吸水垫由底板的一侧依次向所述底板的另一侧粘贴在所述底板上，其结合垫包被有金标抗体a和金标抗体b；硝酸纤维素包被膜上设置有检测线和质控线，检测线包被有Sp100抗原蛋白，质控线包被有金标抗体c。本发明采用间接免疫测定法，引入Sp100抗原蛋白，对结合垫和样品垫进行了工艺优化，来实现抗Sp100抗体的高灵敏度、高特异、高准确性的检测性能，为辅助诊断原发性胆汁肝硬化提供参考依据。