本发明公开了放线菌素D新同系物2-甲基-放线菌素D的制备方法，经核磁与质谱综合解析，确定了该化合物的结构，其化学结构为：为放线菌素D的新同系物。其制法是用累西菲链霉菌Streptomyces recifensis CGMCC No.5228作生产菌。该链霉菌在含有可溶性淀粉的液体培养基中发酵，获得菌丝体、发酵上清液和各种代谢产物。对发酵后的发酵上清液和菌丝体用氯仿或乙酸乙酯萃取，通过提取分离和纯化等方法，得到结构如上的新化合物，通过细胞测定表明该化合物具有抗肿瘤细胞活性。本发明为研制新的抗肿瘤药物提供先导化合物，对开发利用我国的药用放线菌资源具有重要价值。