本发明公开了一种用于鉴定或辅助鉴定小麦抗病基因的PCR试剂盒及其应用。本发明所提供的PCR试剂盒中包含用于鉴定或辅助鉴定小麦抗病基因的多重PCR引物对组，该引物对组由特异于所述Yr17-Lr37-Sr38基因簇的一个引物对，和特异于所述Pch1基因的一个引物对组成；所述特异于Yr17-Lr37-Sr38基因簇的一个引物对为序列表中序列1和序列2所示的两条单链DNA组成的引物对1；所述特异于Pch1基因的一个引物对为序列表中序列3和序列4所示的两条单链DNA组成的引物对2。本发明所提供的引物对组各引物对间不存在抑制和错配，实现了相同温度一次PCR完成一组基因的鉴别，且结果可靠、重复性好，特异性强，成本低，耗时短，为小麦抗病品种选育提供参考依据。