本发明涉及携带O型口蹄疫病毒B细胞表位的VP60蛋白重组杆状病毒及其应用，属于生物技术领域。通过PCR扩增兔出血症病毒衣壳蛋白VP60（无起始密码子）基因，将PCR扩增产物克隆入pMD19-T载体后连接入真核转移载体，插入口蹄疫病毒B细胞表位(200～213aa）构建重组杆状病毒载体，转染Sf9细胞，获得重组杆状病毒。本发明可以提供一种携带O型口蹄疫病毒B细胞表位的兔出血症病毒衣壳蛋白重组杆状病毒及携带O型口蹄疫病毒B细胞表位的兔出血症病毒样粒子（嵌合蛋白），以此嵌合蛋白作为抗原免疫小鼠，可诱导产生抗O型口蹄疫病毒VP1蛋白阳性抗体，因此，此嵌合蛋白可作为预防控制O型口蹄疫疫苗的抗原。