本发明涉及蛋白质染色领域，具体涉及一种考马斯亮蓝染色液及其染色方法和在蛋白检测中的应用。所述考马斯亮蓝染色液是包含10％～20％(v/v)的醇，4.5％～10％(v/v)的酸，5％～10％(w/v)的硫酸铵，0.01％～0.1％(w/v)的考马斯亮蓝的水溶液。所述方法包括以下步骤：A.染色：将SDS-PAGE胶置于考马斯亮蓝染色液中，染色45min以上；B.脱色：用水冲洗染色后的SDS-PAGE胶，将染色液冲洗干净即可。本发明的考马斯亮蓝染色液和染色方法能够在保证灵敏度不降低的情况下，以更低的成本实现对SDS-PAGE胶的染色，且脱色后的胶不易破碎，不会给后续的质谱等研究工作造成困难。