本发明涉及基因工程领域，提供了一种检测易瑞沙适用性基因的方法及试剂盒，该方法包括以下步骤：A.利用易瑞沙适用性基因特异性引物，对待测样品中的多个目标区域进行扩增，并基于扩增产物构建测序文库；B.对测序文库进行单分子扩增，得到与所述多个目标区域对应的多个单分子扩增产物；C.同时对所述多个单分子扩增产物进行高通量基因测序，得到所述多个目标区域的序列信息。该方法和试剂盒能同时对易瑞沙适用性基因的多个目标区域进行区域检测，提高了检测效率，同时还能提高检测的准确性和灵敏度，并能进一步同时对大量样品进行多区域检测。