本发明公开了一种多孔整体柱固定化酶微反应器的制备方法，按照以下方法制备得到：首先制备聚(甲基丙烯酸缩水甘油酯-乙二醇二甲基丙烯酸酯)(poly(GMA-co-EDMA))整体柱，然后分别用半胱胺和金纳米粒子修饰poly(GMA-co-EDMA)整体柱，得到表面固载金纳米粒子的多孔聚合物整体柱。利用Au-NH2键作用，将酶固定于该金纳米粒子修饰的多孔整体柱孔表面，即得多孔整体柱固定化酶微反应器。本发明具有以下优点：制备方法简单，酶固定反应条件温和，酶微反应器的通透性好，固定的酶量多，与自由溶液酶解相比，酶的活性、使用寿命和稳定性高，且可反复使用。