通过三类有效组分合成再混合制备高纯度聚山梨酯80的方法：高纯度山梨醇与环氧乙烷醚化制备山梨醇聚氧乙烯醚（Ⅱ），再与高纯度油酸酯化得山梨醇聚氧乙烯醚油酸酯（Ⅴ）。高纯度一失水山梨醇与环氧乙烷醚化制备一失水山梨醇聚氧乙烯醚（Ⅲ），再与高纯度油酸酯化得到一失水山梨醇聚氧乙烯醚油酸酯（Ⅵ）；高纯度异山梨醇与环氧乙烷醚化制备异山梨醇聚氧乙烯醚（Ⅳ），将异山梨醇聚氧乙烯醚（Ⅳ）与高纯度油酸酯化得到异山梨醇聚氧乙烯醚油酸酯（Ⅶ）。将Ⅴ、Ⅵ、Ⅶ混合并进行精制，得到高纯度聚山梨酯80（Ⅰ）。本发明制备的聚山梨酯80有效组分含量高，非活性成分及杂质含量更低，应用性能提高，可供注射制剂使用。