本发明涉及玫瑰组织培养技术，旨在提供一种组培用无菌玫瑰枝条的制备方法。该方法，包括：将玫瑰枝条修剪清洗后浸泡在25％(v/v)的PTC水溶液，然后用蒸馏水冲洗；将玫瑰枝条正向竖直装入经高压蒸汽灭菌的组培瓶中并盖好瓶盖，然后置于37℃恒温箱中放置24h，然后转至4℃冰箱中放置48h，重复该步骤1次；在无菌条件下将玫瑰枝条切成带腋芽的小段，用70％酒精浸泡并摇动杀菌后取出，用无菌水冲洗，再以升汞浸泡9min后取出用无菌水冲洗，即获得组培用无菌玫瑰枝条。本发明提供了PTC水溶液及采用37℃和4℃这两种温度交替处理，与现有常规方法相比，具有无菌化效果好、发芽率高、操作简便、省时省力、成本低、生产应用性强等优点。