本发明属于药品检验领域，公开了西地那非单克隆抗体及用于检测西地那非的胶体金层析试纸条。本发明西地那非单克隆抗体，由保藏号为CCTCC No.C2010123的杂交瘤细胞系产生。本发明所述的西地那非单克隆抗体理化特性高度均一、生物活性单一、与抗原西地那非结合的特异性强、便于人为处理和质量控制，可在制备西地那非检测用胶体金层析试纸条中应用。一种用于检测西地那非的胶体金层析试纸条，其金标结合垫上包被的金标抗体是本发明所述的西地那非单克隆抗体的胶体金标记物。使用本发明胶体金层析检测试纸条，无需任何其它试剂和仪器，可现场操作，将样品用提取液混合后，取上清液进行检测，在5-10min即可判定检测结果简便、快速、时效性强。