本发明公开了一种香菇多糖酯的制备方法，包括如下步骤：将香菇多糖、短链脂肪酸混合均匀后加入催化剂浓硫酸，于20～30℃搅拌15～20小时，然后加入原料短链脂肪酸的碱金属盐中和剩余的硫酸，反应完全后，控制温度在80℃以下减压蒸馏直至得到固体粗品，所得固体粗品用萃取剂萃取，过滤所得滤液控制温度在80℃以下蒸干后即得香菇多糖酯。本发明提供的新的制备方法反应条件温和、生产成本低、设备投资少，易于实现工业化；并且本发明制得的香菇多糖酯可保持一级结构不被破坏，又可以改变多糖的空间构象，使之充分发挥效用；大大提高其抗病毒等活性，从而有望在有害病毒的预防和治疗上取得突破。