本发明提供了一种可鉴别香菇生产菌种241和241-4的分子特异性标记引物，以及利用该引物对香菇生产菌种241和241-4进行区别和鉴定的方法。所述引物序列为：上游引物：5′-GGTTCTGCTCCTTGTGACTG-3′，下游引物：5′-TCTGCTCTTCAGATGCAAGCT-3′；本发明检测方法与常规形态学检测、拮抗试验、出菇试验相比，具有检测时间短，准确性高的优点；本发明方法检测所需时间只要1～2天，而常规的拮抗试验所需要的时间至少两周时间，出菇试验则需要至少3个月的时间。