本发明提供了五味子甲素在检测细胞色素P4503A酶活性中的用途及检测方法，五味子甲素可以作为为探针底物来检测细胞色素P4503A酶的活性，并通过以五味子甲素或其药物制剂作特异性的探针底物，在反应温度为10℃至60℃之间，获得五味子醇甲作为代谢产物；通过测定五味子甲素底物减少量或五味子醇甲产物生成量作为细胞色素P4503A亚家族酶活性的评价指标。或者通过静脉注射、肌肉注射或口服的方式，使得待测的哺乳动物服用0.01至1000mg/kg体重的五味子甲素或其药物制剂；在0至72小时内选取时间点，收集待测动物的血浆、尿液、粪便或胆汁生物样本；测定五味子甲素底物减少量或五味子醇甲产物生成量，作为细胞色素P4503A亚家族酶活性的评价指标。