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发明授权
CN101003798B 一种重组超广谱β-内酰胺酶的表达纯化及其高密度发酵方法 失效 - 权利终止

  • 专利标题： 一种重组超广谱β-内酰胺酶的表达纯化及其高密度发酵方法
  • 专利标题（英）： Purified expression of recombined beta lactamase in superspectrum, and fermentation process in high density
  • 申请号： CN200610006572.6
    申请日： 2006-01-17
  • 公开(公告)号： CN101003798B
    公开(公告)日： 2010-05-12
  • 发明人: 吕建新
  • 申请人： 温州医学院
  • 申请人地址： 浙江省温州市茶山高教园区温州医学院
  • 专利权人： 温州医学院
  • 当前专利权人： 温州医学院
  • 当前专利权人地址： 浙江省温州市茶山高教园区温州医学院
  • 代理机构： 北京汇泽知识产权代理有限公司
  • 代理商 张瑾
  • 主分类号： C12N9/80
  • IPC分类号： C12N9/80 ;  C12N15/55 ;  C12N1/21 ;  C12R1/19
一种重组超广谱β-内酰胺酶的表达纯化及其高密度发酵方法
摘要：
本发明公开了重组超广谱β-内酰胺酶的表达纯化及其高密度发酵方法。涉及含SHV-4型ESBL基因插入分泌型表达载体，并在大肠杆菌中表达。还涉及中试级别的发酵和纯化，发酵获取大量细菌后，菌体悬液超声破碎、离心获取超声上清及其包涵体沉淀：超声上清通过亲和层析，一步就获取高纯度重组SHV-4型ESBL，平均每升发酵液中得到7mg，酶比活为476IU/mg；而包涵体沉淀的复性和纯化同时进行，沉淀溶于尿素后，采用分子筛层析法纯化，获取高纯度重组SHV-4型ESBL，并在纯化的同时使重组ESBL复性，得到每升发酵液中得到17mg SHV-4型ESBL，酶比活为438IU/mg。本发明为各型ESBL生产制备提供一种方法，为大量制备ESBL打下坚实的基础。
摘要（英）：

This invention discloses a method for expression, purification and high-density fermentation of recombinant extended-spectrum beta-lactamase. The method comprises: (1) inserting SHV-4 type ESBL gene into expression vector, and expressing in Escherichia coli; (2) performing high-density fermentation to obtain large quantities of bacteria, ultrasonically crushing the bacteria suspension, and centrifuging to collect the supernatant and the precipitate of inclusion body; (4) performing affinity chromatography to obtain high-purity recombinant SHV-4 type ESBL (7 mg/L fermentation solution, and specific activity is 476 IU/mg); (5) dissolving the inclusion body in urea, and purifying by molecular sieve chromatography to obtain high-purity recombinant SHV-4 type ESBL. The yield of recombinant SHV-4 type ESBL is 17 mg/L fermentation solution, and the specific activity is 438 IU/mg. This invention provides a method for mass production of ESBL.

公开/授权文献
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